對于不同的(de)目的(de)，應采用(yong)不同的(de)檢測(ce)方法。用(yong)染料和生物(wu)大分子(zi)結合形(xing)成有色的(de)復合物(wu)是電(dian)泳后檢測(ce)最(zui)常(chang)用(yong)的(de)方法。

聚丙烯酰胺(an)凝膠電泳結果不正常現(xian)象和對策

1、指示劑前(qian)沿呈現(xian)(xian)兩邊向(xiang)上(shang)或向(xiang)下的(de)(de)(de)現(xian)(xian)象(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)。向(xiang)上(shang)的(de)(de)(de)“微(wei)笑”現(xian)(xian)象(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)說(shuo)明(ming)凝膠(jiao)(jiao)的(de)(de)(de)不(bu)均(jun)勻冷卻，中(zhong)間部分(fen)(fen)冷卻不(bu)好，所以(yi)導(dao)致凝膠(jiao)(jiao)中(zhong)分(fen)(fen)子有不(bu)同的(de)(de)(de)遷移率(lv)所致。這種情況在用較厚的(de)(de)(de)凝膠(jiao)(jiao)以(yi)及垂直(zhi)電(dian)泳(yong)(yong)(yong)中(zhong)時常發生。向(xiang)下的(de)(de)(de)“皺眉”現(xian)(xian)象(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)常常是由(you)于垂直(zhi)電(dian)泳(yong)(yong)(yong)時電(dian)泳(yong)(yong)(yong)槽的(de)(de)(de)裝置(zhi)不(bu)合適(shi)引(yin)起的(de)(de)(de)，特別(bie)是當(dang)凝膠(jiao)(jiao)和玻璃板組成的(de)(de)(de)“三明(ming)治”底部有氣泡或靠近隔片(pian)的(de)(de)(de)凝膠(jiao)(jiao)聚合不(bu)完全便會(hui)產生這種現(xian)(xian)象(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)。

2、“拖尾(wei)”現象是電(dian)泳中(zhong)最常(chang)見的(de)(de)現象。這常(chang)常(chang)是由于樣(yang)(yang)品(pin)溶解不佳引(yin)起的(de)(de)，克服的(de)(de)辦(ban)法(fa)是在加(jia)樣(yang)(yang)前離(li)心，選用合適(shi)的(de)(de)樣(yang)(yang)品(pin)緩沖(chong)液(ye)和凝膠緩沖(chong)液(ye)，加(jia)增溶輔助試劑。另一方(fang)法(fa)是降低凝膠濃度。

3、“紋理”現(xian)象常(chang)常(chang)是由于樣品中不溶顆(ke)粒引起的，克服辦(ban)法(fa)是增加溶解度和離心除去不溶性顆(ke)粒。

4、蛋白(bai)帶偏斜常(chang)常(chang)是由于濾紙條或電極放(fang)置不平行所引起(qi)(qi)的，或由于加樣位置偏斜而引起(qi)(qi)。

5、蛋白(bai)(bai)帶過寬，與鄰(lin)近蛋白(bai)(bai)泳(yong)道的蛋白(bai)(bai)帶相(xiang)連，這是由(you)于加樣量太多或加樣孔泄漏引起(qi)的。

6、蛋(dan)白(bai)帶模糊不(bu)清和分(fen)(fen)(fen)辨不(bu)佳是由(you)于多(duo)種原因引起的(de)(de)(de)(de)(de)。雖然梯度凝(ning)膠(jiao)可以(yi)提高分(fen)(fen)(fen)辨率(lv)，但與(yu)其他方法相比，常(chang)規聚丙烯酰胺凝(ning)膠(jiao)電泳是分(fen)(fen)(fen)辨率(lv)較(jiao)低(di)的(de)(de)(de)(de)(de)方法。為(wei)了提高分(fen)(fen)(fen)辨率(lv)，不(bu)要加(jia)過多(duo)的(de)(de)(de)(de)(de)樣(yang)(yang)品，小(xiao)體積(ji)樣(yang)(yang)品可給出(chu)窄(zhai)帶。加(jia)樣(yang)(yang)后應(ying)立即電泳，以(yi)防止(zhi)擴散。選擇合適的(de)(de)(de)(de)(de)凝(ning)膠(jiao)濃度，使組分(fen)(fen)(fen)得以(yi)充分(fen)(fen)(fen)的(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)(fen)(fen)離。通(tong)常(chang)靠近前(qian)(qian)沿(yan)的(de)(de)(de)(de)(de)蛋(dan)白(bai)帶分(fen)(fen)(fen)辨率(lv)不(bu)佳，所以(yi)應(ying)根據分(fen)(fen)(fen)子量與(yu)凝(ning)膠(jiao)孔徑的(de)(de)(de)(de)(de)關系，灌制(zhi)足夠(gou)長度的(de)(de)(de)(de)(de)凝(ning)膠(jiao)，以(yi)使樣(yang)(yang)品不(bu)會走出(chu)前(qian)(qian)沿(yan)。樣(yang)(yang)品的(de)(de)(de)(de)(de)蛋(dan)白(bai)水(shui)解(jie)(jie)作(zuo)(zuo)用(yong)也(ye)引起擴散而使分(fen)(fen)(fen)辨率(lv)降低(di)。水(shui)解(jie)(jie)作(zuo)(zuo)用(yong)通(tong)常(chang)發(fa)生在(zai)樣(yang)(yang)品準備的(de)(de)(de)(de)(de)時候，系統(tong)中的(de)(de)(de)(de)(de)內源性(xing)蛋(dan)白(bai)酶會水(shui)解(jie)(jie)樣(yang)(yang)品蛋(dan)白(bai)，如(ru)果在(zai)緩沖液(ye)中加(jia)蛋(dan)白(bai)酶抑制(zhi)劑可以(yi)減少(shao)這種情況的(de)(de)(de)(de)(de)發(fa)生。